হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) পদ্ধতিতে ফল ও সবজিতে অক্সালিক অ্যাসিডের পরিমাণ নির্ণয়
১. পরীক্ষণ নীতি ও পদ্ধতি নকশা
ফল ও সবজিতে একটি সাধারণ জৈব অ্যাসিড হিসেবে অক্সালিক অ্যাসিডের পরিমাণ খাদ্যের স্বাদ এবং পুষ্টিগুণকে সরাসরি প্রভাবিত করে। এই পরীক্ষায় রিভার্সড-ফেজ হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (RP-HPLC) ব্যবহার করা হয়েছে। অ্যাসিডিক মোবাইল ফেজ অবস্থায়, একটি C18 ক্রোমাটোগ্রাফিক কলাম ব্যবহার করে অক্সালিক অ্যাসিডকে হস্তক্ষেপকারী পদার্থ থেকে বেসলাইন-সেপারেট করা হয়। অক্সালিক অ্যাসিড অণুতে থাকা কার্বক্সিল গ্রুপের UV শোষণ বৈশিষ্ট্যের উপর ভিত্তি করে পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য ২১০ nm-এ সেট করা একটি আল্ট্রাভায়োলেট ডিটেক্টর ব্যবহার করা হয়।
২. স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ এবং নমুনা প্রস্তুতি
স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ প্রস্তুত করতে একটি গ্রেডিয়েন্ট ডাইলিউশন পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়: ২৫.০ মিলিগ্রাম অক্সালিক অ্যাসিড ডাইহাইড্রেট সঠিকভাবে ওজন করে ২৫ মিলি আল্ট্রাপিউর জল দিয়ে লঘু করে একটি ১ মিলিগ্রাম/মিলি স্টক দ্রবণ তৈরি করা হয়। এটিকে পর্যায়ক্রমে ৫০, ১০০, ২০০, ৪০০, এবং ৮০০ মাইক্রোগ্রাম/মিলি ঘনত্বের স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণের একটি সিরিজে লঘু করা হয়, যেখানে প্রতিটি ঘনত্ব তিনবার করে ইনজেক্ট করা হয়।
নমুনা প্রস্তুতির জন্য মাইক্রোওয়েভ-সহায়ক নিষ্কাশন পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়: ৫.০০ গ্রাম ফল/সবজির হোমোজিনেট ওজন করে, এর সাথে ১০ মিলি ০.১ মোল/লিটার হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দ্রবণ যোগ করে, ৬০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ১০ মিনিটের জন্য মাইক্রোওয়েভে তাপ দেওয়া হয়, একটি ০.৪৫ মাইক্রোমিটার মেমব্রেন ফিল্টারের মাধ্যমে ছেঁকে নেওয়া হয় এবং পরীক্ষার জন্য পরিস্রুত দ্রবণটি সংগ্রহ করা হয়।
৩. ক্রোমাটোগ্রাফিক শর্তাবলির অনুকূলীকরণ
মোবাইল ফেজটি হলো একটি ০.০১ মোল/লিটার পটাশিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট বাফার (পিএইচ ২.৫)–অ্যাসিটোনাইট্রাইল (৯৫:৫) সিস্টেম, যার ফ্লো রেট ০.৮ মিলি/মিনিট এবং কলামের তাপমাত্রা ৩৫° সেলসিয়াস। অ্যাসিটোনাইট্রাইলের অনুপাত সমন্বয় করে দেখা যায় যে, যখন জৈব ফেজের পরিমাণ ১০% ছাড়িয়ে যায়, তখন অক্সালিক অ্যাসিডের রিটেনশন টাইম কমে ৩ মিনিটেরও কম হয়ে যায়, কিন্তু পিক টেইলিং ঘটে। চূড়ান্ত অপ্টিমাইজড শর্তের অধীনে, অক্সালিক অ্যাসিডের রিটেনশন টাইম হয় ৪.২ মিনিট, যা পার্শ্ববর্তী সাইট্রিক অ্যাসিড এবং ম্যালিক অ্যাসিড থেকে সম্পূর্ণ পৃথকীকরণ অর্জন করে (রেজোলিউশন > ১.৫)।
৪. পদ্ধতি যাচাইকরণ
লিনিয়ার রেঞ্জ ভেরিফিকেশন দেখায় যে ১০–১০০০ µg/mL রেঞ্জে পিক এরিয়া এবং কনসেনট্রেশনের মধ্যে একটি ভালো রৈখিক সম্পর্ক বিদ্যমান (R² = ০.৯৯৯৩)। সিগন্যাল-টু-নয়েজ রেশিও পদ্ধতি দ্বারা নির্ধারিত ডিটেকশন লিমিট (LOD) হলো ০.৫ µg/mL। রিপিটেবিলিটি টেস্টে, একই পালং শাকের নমুনার ছয়টি পুনরাবৃত্তিমূলক পরিমাপের জন্য RSD হলো ১.৮%। তিনটি স্তরে (৮০%, ১০০%, এবং ১২০%) স্পাইক রিকভারি পরীক্ষায় গড় রিকভারি পাওয়া গেছে যথাক্রমে ৯৮.২%, ১০২.৪%, এবং ৯৭.৮%, যা পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য প্রয়োজনীয় শর্ত পূরণ করে।
৫. বাস্তব নমুনার বিশ্লেষণ
বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ ছয়টি ফল ও সবজি পরীক্ষা করা হয়েছিল: পালং শাক (৩৫৬ ± ১২ মিগ্রা/১০০ গ্রাম), সেলারি (২১৫ ± ৯ মিগ্রা/১০০ গ্রাম), টমেটো (১৮ ± ২ মিগ্রা/১০০ গ্রাম), আপেল (৬ ± ১ মিগ্রা/১০০ গ্রাম), কলা (শনাক্ত করা যায়নি), এবং ব্রোকলি (৮৯ ± ৫ মিগ্রা/১০০ গ্রাম)। জাতীয় আদর্শ পদ্ধতির (GB 5009.277-2016) সাথে তুলনা করে দেখা গেছে যে, দুটি পদ্ধতির মধ্যে আপেক্ষিক বিচ্যুতি ৫%-এর কম, যা এই পদ্ধতির নির্ভরযোগ্যতা যাচাই করে। বিশেষত, কম-মাত্রার নমুনা বিশ্লেষণের ক্ষেত্রে HPLC পদ্ধতিটি প্রচলিত টাইট্রেশন পদ্ধতির চেয়ে বেশি সংবেদনশীলতা প্রদর্শন করে।
৬. মূল বিষয়সমূহ
নমুনা প্রাক-প্রক্রিয়াকরণের সময় pH মান কঠোরভাবে নিয়ন্ত্রণ করুন। যদি নিষ্কাশিত নমুনার pH ৩-এর বেশি হয়, তাহলে ক্যালসিয়াম অক্সালেট অধঃক্ষেপণের ফলে পরীক্ষার ফলাফল খারাপ আসবে। লবণ অধঃক্ষেপণ এবং কলাম বন্ধ হয়ে যাওয়া এড়ানোর জন্য মোবাইল ফেজ প্রতিদিন নতুন করে প্রস্তুত করা উচিত। প্রতি ২০টি ইনজেকশনের পর, কলামের কার্যক্ষমতার অবনতি রোধ করতে অ্যাসিটোনাইট্রিল-পানি (৩০:৭০) দিয়ে ৩০ মিনিটের জন্য কলামটি ফ্লাশ করুন। রঞ্জক পদার্থযুক্ত নমুনার (যেমন, বেগুনি বাঁধাকপি) ক্ষেত্রে, ইনজেকশনের আগে একটি সলিড-ফেজ এক্সট্র্যাকশন পরিশোধন ধাপ যোগ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
৭. প্রয়োগ ও সম্প্রসারণের দিকনির্দেশনা
এই পদ্ধতিটি মূত্র এবং রক্তের মতো জৈবিক নমুনায় অক্সালিক অ্যাসিড সনাক্তকরণের জন্য সম্প্রসারিত করা যেতে পারে। মোবাইল ফেজের গঠন সামঞ্জস্য করে (যেমন, টেট্রাবিউটাইলঅ্যামোনিয়াম হাইড্রোক্সাইড যোগ করে), অক্সালিক অ্যাসিড এবং এর মেটাবোলাইটগুলি একই সাথে নির্ণয় করা যেতে পারে। একটি মাস স্পেকট্রোমেট্রি ডিটেক্টরের সাথে মিলিত হয়ে, আরও নির্ভুল একটি ট্রেস সনাক্তকরণ পদ্ধতি স্থাপন করা যেতে পারে। খাদ্য প্রক্রিয়াকরণ শিল্পে, এই পদ্ধতিটি কম-অক্সালিক অ্যাসিডযুক্ত জাত নির্বাচন এবং রান্নার প্রক্রিয়া অপ্টিমাইজ করার জন্য গুরুত্বপূর্ণ ডেটা সহায়তা প্রদান করতে পারে।
জিবো আনহাও কেমিক্যাল কোং, লিমিটেড – অক্সালিক অ্যাসিড
জিবো আনহাও কেমিক্যাল কোং, লিমিটেড চীনের শানডং থেকে উচ্চ-মানের অক্সালিক অ্যাসিড (শিল্প গ্রেড, ন্যূনতম ৯৯.৬%) এর একটি নির্ভরযোগ্য সরবরাহকারী এবং রপ্তানিকারক। আমাদের অক্সালিক অ্যাসিড একটি সাদা স্ফটিকাকার কঠিন পদার্থ, যা ইথানেডিওইক অ্যাসিড নামেও পরিচিত এবং এর আণবিক সংকেত C₂H₂O₄। এর বৈশিষ্ট্য হলো উচ্চ বিশুদ্ধতা, কম অশুদ্ধি এবং বিভিন্ন ব্যাচে স্থিতিশীল গুণমান, যা বস্ত্র, চামড়া, ধাতুবিদ্যা, দুর্লভ মৃত্তিকা প্রক্রিয়াকরণ, রাসায়নিক পরিষ্কারকরণ এবং নির্মাণ শিল্পের চাহিদা পূরণ করে।
আমরা অ্যানহাইড্রাস এবং ডাইহাইড্রেট উভয় প্রকার অক্সালিক অ্যাসিড সরবরাহ করি, যা ২৫ কেজি, ৫০ কেজি এবং ১০০০ কেজির বাল্ক ব্যাগে পাওয়া যায়। কঠোর মান নিয়ন্ত্রণ পদ্ধতি, সম্পূর্ণ পরীক্ষার প্রতিবেদন এবং নমনীয় সরবরাহ পরিকল্পনার মাধ্যমে আমরা বিশ্বব্যাপী ক্রেতাদের জন্য স্থিতিশীল সরবরাহ এবং ধারাবাহিক কার্যকারিতা নিশ্চিত করি। আমাদের পণ্য নির্ভরযোগ্য গুণমান এবং প্রতিযোগিতামূলক মূল্যের জন্য স্বীকৃতি লাভ করে দক্ষিণ-পূর্ব এশিয়া, ইউরোপ, আফ্রিকা এবং আমেরিকায় ব্যাপকভাবে রপ্তানি হয়েছে।
নির্ভরযোগ্য অক্সালিক অ্যাসিড সরবরাহ এবং পেশাদার ওয়ান-স্টপ রাসায়নিক পরিষেবার জন্য জিবো আনহাও কেমিক্যাল বেছে নিন।
আপনার ব্যবসার জন্য স্থিতিশীল কার্যকারিতা ও মূল্য প্রদানকারী উচ্চ-বিশুদ্ধ অক্সালিক অ্যাসিডের জন্য জিবো আনহাও কেমিক্যাল বেছে নিন। পাইকারি অর্ডার বা প্রযুক্তিগত বিবরণের জন্য আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন: info@anhaochemical.com
